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9.对肝细胞损伤的保护作用:9.1.丹参对实验性肝再生的影响:实验动物为大白鼠,体重180-220g,雌雄兼用。动物分为两组。于实验第1日上午9-11小时,除正常组外,全部动物在乙醚麻醉下,行部分肝切除术,切除肝脏左叶及中叶(约占肝重68%),称重。术后当天下午及次日上午给药组分别给药,经皮下注射1ml/只。实验第44小时,腹腔注射秋水仙碱1ml/只(含0.2mg)、48小时,全部处死动物。取血清作谷丙转氨酶(SGPT)测定(改良金氏法),应用反向血凝法检测甲胎蛋白(AFP)。称肝重,计算再生度。取小块肝组织固定于10%福尔马林液,石腊包埋,苏木素-伊红染色,镜检作组织学观察,并计算核分裂指数。实验结果表明,丹参可使肝再生度、核分裂相指数、AFP检出率均增高,说明丹参具有促进肝再生的作用。至于其作用机理,可能与丹参改善血液循环的作用有关。在全身及局部组织血液循环改善的基础上,使门脉血流增加,改善肝脏供血和营养,可能是促进肝脏再生的重要因素。肝脏再生受到多种激素的调节,尤其是胰岛素和胰高血糖素具有明显促进肝再生的作用。丹参等活血化瘀药物改善血液循环。同时可带来较多的胰岛素和胰高血糖素,在促进肝再生中亦可能有一定作用。
9.2.丹参对大鼠急性肝损伤的作用:取大白鼠,体重200-260g,雌雄兼用。实验分组进行。即正常组、肝损伤组以及丹参给药组,各组8只大鼠。实验第1、5日除正常组外,其余2个组均皮下注射四氯化碳0.5ml/100g体重,自实验第2日起各治疗组动物开始给药,肝损伤组给以等量生理盐水。实验第7日下午6小时全部动物禁食,次晨6小时以50%葡萄糖灌胃,每只动物2ml。2小时后处死动物,迅速切取部分肝脏作糖原和甘油三酯测定;其余肝脏部分分别用10%福尔马林液固定,进行苏木精一伊红染色(HE)和用Carnoy液固定,PAS法显示糖原。取血清进行谷丙转氨酶(SGPT)和B脂蛋白测定。经统计学处理,丹参组较肝损伤组SGPT活力明显降低(P《0.01);肝内甘油三酯含量与肝损伤组相比较,仅丹参组有明显降低(P《0.05);血清B脂蛋白测定结果表明,各给药组与肝损伤组相比均无明显差异。给药组肝匀浆糖原含量与肝损伤组相似(P》0.05)。组织化学染色所显示的肝糖原含量与上述测定结果大体一致。病理组织学观察亦表明,丹参可明显减轻肝坏死和炎症反应(P《0.05和P《0.01)。
9.3.丹参对实验性肝硬变的防治作用:取大白鼠,体重200-320g,雌雄兼用,按前述实验分组。除正常组外,各组均饲单纯玉米面,混以0.5%的胆固醇(前2周加猪油20%),以30%乙醇为饮料。于实验第1日,除正常组外,其余各组每只动物皮下注射四氯化碳0.5ml/100g体重,以后每隔3日皮下注射油剂四氯化碳(40%植物油溶液)0.3ml/100g体重。从实验第5周开始,给药组分别给予中药,对照组给等量生理盐水,至第9周末处死动物。取血清作蛋白电泳分析、SGPT及胎儿甲种球蛋白(AFP)检测(反向血凝法)。取肝脏左叶固定于10%福尔马林液中,作苏木精一伊红染色(HE)及胶原纤维染色(VG);其余肝脏部分留作羟脯氨酸测定,以求胶原蛋白含量。实验结果表明,丹参给药组能明显降低胶原蛋白含量(P《0.01)及血清r球蛋白含量。羟脯氨酸是胶原降解的产物,经尿排出,因此测定尿羟脯氨酸量可反应肝内胶原降解的速度。
另有实验结果表明,经丹参治疗3周后,大白鼠尿羟脯氨酸排泄量明显高于对照组,间接证明丹参可促进胶原纤维的降解。体内胶原分解主要是通过胶原酶的作用,在中性环境中,经胶原酶作用,可将胶原蛋白裂解为两部分,一部分为大的3/4,一部分为小的1/4,裂解后的碎片,再经非特异性蛋白酶作用逐渐分解。因此,胶原降解的关键与胶原酶的作用密切相关。丹参促进胶原降解可能是通过增加胶原酶的产生或增强胶原酶的活性而实现的。
9.4.丹参对肝纤维重吸收的作用:实验取大白鼠23只,体重170-210g,雌雄兼用,分成肝硬化对照组。给药组及正常对照组。实验第l日,前两组动物皮下注射四氯化碳40.5ml/100g体重,以后每隔3日皮下注射油剂四氯化碳(40%植物油溶液)0.3ml/100g体重。单纯玉米面(前2周加入20%猪油)加入0.5g%胆固醇为饲料,30%酒精为唯一饮料。实验第9周,撤除上述全部病因刺激,恢复正常膳食及饮水,给药组开始给药,肝硬化对照组给生理盐水。于给药后1、2、3周末收集各组动物16小时尿,测定尿羟脯氨酸含量。于实验第ll周末断头处死全部动物。制片用JEM100CX型电镜观察。其余肝组织留作肝羟脯氨酸测定,以计算肝胶原蛋白含量。实验结果表明,经丹参治疗的动物,肝纤维化较对照明显减轻,且肝脏胶原蛋白含量亦明显低于对照组。说明药物有促进肝纤维重吸收的作用。至于丹参减轻肝纤维化的机理尚不清楚,就现有资料认为,丹参抑制纤维增生与丹参促进坏死肝细胞的修复和及时再生有关。
9.5.丹参注射液对大鼠部分肝切除后肝脏再生的影响:取雌性Wistar大白鼠,体重140-190g,饲以一般饮食,手术前后不禁食水。术前称体重,在轻度乙醚麻醉下行肝左时及正中叶切除术,并将切除之肝脏称重。手术均在上午8:30-11:30之间进行。术后动物随机分为6组:用药组按术后处死时间24、48及72小时分为3组,对照组亦按处死时间分为3组。于述后当日起,每天下午4点给各用药组动物腹腔注射丹参注射液0.66ml/只。分别于手术后24小时、48小时及72小时将各组动物在乙醚麻醉下处死。取出全部残留肝脏,观察丹参注射液对大鼠部分肝切除后肝脏DNA合成率、DNA含量、肝细胞标记核数、肝细胞分裂相以及再生肝重变化的影响。实验结果表明丹参注射液能够促进肝脏再生时的DNA合成和细胞分裂增殖过程,具有一定的促进肝再生作用。丹参的这种作用可能是通过改善肝脏局部血液循环,加强肝再生内在因素的作用而实现的。
戚心广等观察了丹参等对实验性肝损伤大鼠的肝细胞的保护作用,通过肝损伤大鼠肝的光镜及电镜的病理变化及其血浆纤维联结蛋白水平的消长,显示出丹参可以刺激大鼠血浆纤维联结蛋白(PFN)水平的升高,从而提高其网状内层系统的吞噬功能及调理素活性,防止肝脏的免疫损伤,达到保护肝细胞和促进肝细胞再生的作用。近年来,许多学者证实血浆PFN是单核-巨噬细胞系统的主要调理素,其主要功能之一是作为网状内皮系统吞噬作用的一种介质,对内毒素及许多损肝因子有调理作用。提示丹参不单纯是改善肝脏微循环,供给肝脏有益因子,更重要的是丹参可以提高PFN水平,增强网状内皮系统吞噬功能和调理素活性,避免肝脏免疫损伤,最终起到保护肝细胞和促进肝细胞的再生作用。
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