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1.8.丹参酮ⅡA磺酸钠对豚鼠心肌钙反常的保护作用:健康豚鼠,体重250-280g,实验前禁食一夜,称重,肝素5mg腹腔内注射,20分钟后戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内注射。麻醉后开胸,迅速取出心脏,浸于用冰冷却的K-液中,主动脉插管后将心脏放入恒温恒压离体心脏灌流装置,于37℃,80cmH2O压力条件下,以Langenclorff法灌流心脏。并按文献53要求造成钙反常模型,然后进行实验。
结果表明,丹参酮ⅡA磺酸钠对心肌钙反常损伤具有明显的保护作用,抑制钙内流,减轻钙反常过程中心组织钙沉积和心肌损伤所致的蛋白(酶)释放(P《0.01)。该作用在一定范围内具有剂量依赖关系。30mg/L、40mg/L分别能降低心肌组织蛋白释放量52.8%、66.2%,降低钙摄取量25.8%、36.9%。作用效果优于异博定。由于钙反常中钙的大量内流是在无钙灌流引起膜通透性增强的基础上由氧自由基引起的脂质过氧化反应所启动,推测丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过膜稳定作用和氧自由基清除剂作用抑制钙离于内流。
1.9.丹参酮ⅡA磺酸钠豚鼠心室肌单细胞慢反应动作电位的作用£o耐钙的成年豚鼠心室肌细胞分离方法如报道并略作修改。将分离的成年豚鼠心室肌单细胞在高钾(25mmol/L)溶液中部分除极化使钠通道失活,用细胞内刺激诱发慢反应动作电位。20mmol/L的丹参酮ⅡA磺酸钠对这种慢反应动作电位有明显的抑制作用。在20mmol/L浓度范围内,丹参酮ⅡA磺酸钠对0.28mmol/L的异内肾上腺素强化的慢反应动作电位有浓度依赖性抑制作用。而且,随异丙肾上腺素浓度的增加(69mmol/L-55mmol/L)抑制作用更加明显。以上结果提示丹参酮ⅡA磺酸钠可能是一种钙拮抗剂。
另外,50-100mmol/L的丹参酮ⅡA磺酸钠使分离的成年豚鼠心室肌单细胞快反应动作电位的幅度降低,达峰值的时间延长。提示高浓度的丹参酮ⅡA磺酸钠对钠通道也有一定的阻断作用。
1.10.丹参酮ⅡA磺酸钠对动物心肌电和机械活动的影响:豚鼠及免,击头致昏后取心脏,置于35±1℃生理溶液中,排尽瘀血后制备心房或心室肌条,或窦房结部位的标本。猪,电击致昏取心脏,置于35±1℃生理溶液中数分钟,排出瘀血后存放于4-8℃生理溶液中,在室温下摘取右心室肉柱,1小时内完成。所有实验动物雌雄不拘。豚鼠、兔和猪离体心肌实验表明,丹参酮ⅡA磺酸钠可抑制心肌收缩力;缩短动作电位时程,而对O相上l速率影响较小;降低慢反应电位除极速率;减慢窦房结细胞的自律性。提示丹参酮ⅡA磺酸钠可能影响ca2+向细胞的内流。另外,实验结果还表明丹参酮ⅡA磺酸钠对肌张力产生明显抑制的浓度(4ug/ml)小于对动作电位产生明显影响的浓度(40ug/ml)。
文允锰等采用年龄35月,体重300-500g的大鼠VsmCa2+内流均有抑制作用。体内实验亦证明能明显激活正常动物VsmC2+,而抑制高血压大鼠的VsmCa2+内流,具有双向调节作用。以上结果提示,在细胞水平,ca2+在遗传或继发性高血压大鼠的发病中均具有重要作用,而丹参可以纠正VsmCa2+内流的异常。
丹参酮ⅡA磺酸钠能增加冠状动脉血流量,扩张微血管,减慢心率及负性肌力等作用,具有钙拮抗剂的共同作用特点、实验支持丹参酮ⅡA磺酸钠属钙拮抗剂。但从另外一些实验结果来看,丹参酮ⅡA磺酸钠的心血管作用与Ca2+通道拮抗剂似有所差别,是否具有Ca2+通道拮抗剂的药理特性,有待进一步研究。
2.对心肌缺血缺氧的保护作用:2.1.耐缺氧作用:2.1.1.丹参素(B-3,4二羟基苯基乳酸,DS-182)及另二种水溶性成分对小鼠耐缺氧时间的影响:鼠70只,体重18-22g,用密闭的广口瓶进行常压耐氧试验,按照文献方法腹腔注射给药20分钟后给药。随机分成10组,对照组,10鼠,每鼠注射生理盐水0.2ml;DS-182A组,15鼠,剂量为300mg/kg;DS-182B组,15鼠,剂量为450mg/kg;PCAD(原儿茶醛)组,10鼠,剂量为300mg/kg;D5-201组,10鼠,剂量为300mg/kg;氯丙嗪组,10鼠,注射氯丙嗪1mg/kg。
实验结果表明,两种剂量的丹参素(DS-182)都能显着延长小鼠耐缺氧时间,对照组生存18.4±0.96分钟,DS-182两组分别为28.93±2.26及33.14±2.40分钟(P《O.01)。丹参酮ⅡA磺酸钠(DS-201)也延长为23.7±1.49(P《0.O5)。原儿茶醛(PCAD)抗缺氧无效。
2.1.2.丹参酮ⅡA磺酸钠对小鼠常压缺氧的影响:实验分对照和给药组,每组各用小鼠12只,由腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠,给药后1/2或l小时,将小鼠放入磨口玻璃瓶内,瓶容量为150ml,内放少许钠石灰,吸收CO2及水气。每瓶1鼠,放入后密封盖紧,开始记录其存活时间,以时间测验比较组间均数差异的显着性。结果剂量为100mg/kg,给药后1/2或小时,存活时间无显着延长。剂量为200mg/kg,共试验四批,其平均存活时间比对照组显着延长(P《O.05-0.01)。
2.1.3.丹参酮ⅡA磺酸钠对小鼠常压耐氧条件下组织中乳酸含量的影响:雄性小鼠36只,实验分3组,缺氧组:小鼠放入测氧耗瓶内,观察瓶内氧含量达到6%时(严重缺氧),立即放入于冰保温瓶内,取出后摘出心脏和大脑,称重,然后磨成匀浆,10%三氯醋酸沉淀蛋白,按比色法测定乳酸。丹参酮ⅡA磺酸钠加缺氧组:腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠,剂量为200mg/kg,过1/2小时进行缺氧试验。每次实验中均有正常小鼠为对照测定组织内乳酸。结果表明,缺氧组的心脏和大脑,乳酸含量均较正常组显着增加,而给丹参酮ⅡA磺酸钠再进行缺氧试验,组织内乳酸含量不增加,与正常组的乳酸含量近似。结果指出,小鼠逐渐加深缺氧的程度,心脏和大脑组织内乳酸含量均有明显的增加,而丹参酮ⅡA磺酸钠可改善缺氧引起心肌代谢的紊乱。提示丹参酮ⅡA磺酸钠提高小鼠缺氧的耐受力与改善缺氧后的心肌代谢紊乱有关。
2.2.对心肌的保护作用:2.2.1.实验用雄性小白鼠10只,体重为19-26g。分为2组。在5只小白鼠的尾部静脉注射O.6ml丹参(相当于生药0.9g);另5只小白鼠则注射生理盐水作对照组。两组中分别选取体重相近者配成5对,于注射后约30分钟将配对的2组动物置于密闭容器的水中游泳31-36分钟,然后从容器中取出后处死摘死心脏,进行超微结构观察。
以上结果表明,缺氧对照组的变化特征符合急性缺氧的心肌超微结构变化,而丹参能减轻缺氧引起的心肌损伤,与以上实验结果是相吻合。
2.2.2.丹参对免急性缺血心肌间盘损伤的作用:验动物为家兔,用戊巴妥钠麻醉,在消毒条件下自左胸第四、五或第五、六肋间切开胸腔,暴露心脏,同时用人工呼吸器维持动物呼吸。以左冠状静脉前降支为指标进行结扎。在离静脉根部约5mm处,围绕血管及其周围的一些组织用缝线结扎两道。结扎前后记录肢导联心电图。在结扎后的肢导联记录中,可以出现T波下降或ST段抬高。这些变化往往只见于一、二个肢导联,而且通常在结扎后24分钟内就已恢复、手术后所有兔都肌肉注射青霉素K或青霉素G20万单位。一部分兔静脉注射用盐水作为对照。注射时间分别为结扎后:、4、12、20、28、36和44分钟。第一次注射丹参量约为0.5ml/kg(每lml相当于生药2g)体重,以后每次注射约1.5ml/kg体重。结扎血管后48分钟,动物再在戊巴比妥钠麻醉下开胸,自心脏结扎处沿血管而下,在距结扎点1、5、9和13mm处各取一小块心肌,切片后作电子显微镜观察,结果丹参组与对照组的心肌线粒体损伤程度无明显差别,可是在丹参组的心肌切片中常见到成堆的线粒体,而对照组中较少见,在缺血心肌组织中的线粒体明显受损的情况下,对照组的间盘受损严重,有的呈糊泊状;而丹参组的间盘受损较轻,呈小河状,还有相当多的间盘基本正常,已证实间盘中有一些特殊的区域如粘连膜(fasciaadthereus)。桥粒(desmosome)和连络膜(nexus),分别和心肌细胞收缩张力的外传、细胞轮廓的维持和细胞间兴奋的传递有关,丹参能减轻间盘受损,维持细胞膜的完整性,可能是其发挥疗效的一个作用机制。
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