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2.4.鹤草酚悬液对人精子的影响:采用3人的精液进行试验,部分试验用稀释精液,部分试验用原精液。稀释精液试验用鹤草酚悬液4种浓度,原精液试验用鹤草酚悬液2种浓度,各种浓度分别进行3-5次试验。鹤草酚悬液2×10(-4)和3×10(-4)g/ml浓度对人的稀释精液,在5分钟内可杀死全部精子,4×10(-4)和5×10(-4)g/ml,在1分钟内即可杀死全部精子;而对人的原精液则需较高浓度,1×10(-3)g/ml在5分钟内可杀死全部精子,2×10(-3)g/ml在1分钟内可杀死全部精子。
3.抗肿瘤作用:3.1.对癌细胞的影响:取接种6-9天生长良好的肝癌腹水癌小鼠腹水液,用无菌生理盐水稀释至1×10(7)-2×10(7)癌细胞/ml,取此癌细胞液0.5ml加等容积不同浓度鹤草酚药液,使鹤草酚最终浓度为2.5-0.08mg/ml的四种浓度,轻摇混匀,于37℃下温孵,和3小时,然后取出,再加0.05%伊红,镜检,计数被染成红色的癌细胞百分率(死亡癌细胞被赤染,赤染百分数称赤染率),温孵1小时和3小时的四次实验结果列于表。结果看出,0.16mg/ml鹤草酚对癌细胞已具有一定杀灭作用,1.25mg/ml时可在1小时内将癌细胞全部杀死。生理盐水对照组1小时内癌细胞赤染率为7.3%。10(2)-3×10(2)癌细胞/ml,每只小鼠于右腋下皮下接种0.2ml,每大组动物接种一种瘤源,次日每大组动物随机分成给药组和生理盐水对照组,并开始每天腹腔注射鹤草酚注射液30mg/kg,对照组注同体积生理盐水,连续给药12-14天,停药次日称动物体重和瘤重,重复两批实验的结果证明,鹤草酚对S37和U14具有明显的实验治疗作用,对肿瘤生长的抑制率分别为47.0%(P《0.01)和38.7%(P《0.05)。对S180和肝癌肉瘤也有一定抑制作用,其抑制率分别为26.3%和23.5%(P《0.05)。给药组动物在实验过程中没有死亡。经解剖观察。给药组与对照组动物胸腺和脾脏大小差别不明显,上4种瘤谱的实验动物,于实验后体重均有明显增加,给药组与对照组动物体重增长速度相近,可见该剂量鹤草酚对实验小鼠看不出明显毒性反应。对JTC-26抑制率100%。HELA细胞集落法试验,仙鹤草根中含有细胞毒成分,该成分溶于甲醇和乙醚,可强烈抑制HELA细胞集落形成。在500μg/ml浓度下,不但不损害正常细胞,反而促进正常细胞100%的生长发育(实际上是具有扶正作用)。
3.2.瘤体局部和腹腔同时给药对实体瘤的影响:接上述接种方法,给小鼠接种S180和37,于接种后次日每日腹腔注射鹤草酚注射液30mg/kg,对照组动物注同体积生理盐水,于给药后第第5天开始,给药组动物注鹤草酚总量仍为30mg/kg,但其中每只动物给瘤体内注射0.25mg,余下药量腹腔注射给予,从接种后次日开始给药,共给药14天。第l5天处死称体重和瘤重,结果表示,鹤草酚对S180抑制率为67.7%(P《0.01)。对S37抑制率68.1%(P《0.01)。可见此种给药方式的疗效比单独腹腔给药疗效明显。
3.3.对腹水癌的影响:抽取肝癌腹水癌腹水液,用无菌生理盐水稀释成1×1(2)-2×10(2)癌细胞/ml,接种于小鼠(每只小鼠腹腔注射0.2ml)次日随机分为给药组与对照组,并腹腔注射鹤草酚30mg/kg,每天1次,连续给药7天,对照组注同体积生理盐水,观察30天内各鼠死亡时间(不死者以存活30天计算),计算生命延长率结果,肝癌腹水癌给药组动物24只平均存活26.2±0.9天,对照组25只平均存活17.5±1.3天。生长延长率为49.6%(P《0.01);鹤草酚对肝癌腹水癌动物有明显延长生命的作用。
3.4.对S180的影响:实验方法按国家抗肿瘤药物体内筛选规程进行。结果表明,仙鹤草醇提取物(根)1.5g/kg×10,腹腔注射,重复实验,对小鼠S180的抑制率分别为57.2%(P《0.001)、53.2%(P《0.01)和56.2%(P《0.01);按1000mg/kg体重口服给移植肉瘤-180的豚鼠,每天一次,肿瘤抑制率达37.424%;按100mg/kg体重腹腔注射移植肉瘤-180的小鼠,热水提取物的抑制率为18.5%,乙醇提取物为7.4%,或有其根水提取物,茎叶水提取物及醇提取物无抗肿瘤作用。提示仙鹤草抗肿瘤成分存在于根(包括根芽)中,属醇溶性物质。另外,光镜观察表明,对照组瘤细胞增生活跃,侵袭力强。给药组瘤细胞核分裂相减少,退变坏死严重,胞浆呈网状或空泡状,乃至透明,核膜增厚,核染色质凝集成粗颗粒状,严重者,核碎裂和核固缩。电镜观察表明,对照组瘤细胞与光镜所见相同。给药组瘤细胞的显着变化在细胞核,核膜间隙扩张,出现环状核仁,核呈同质化现象。此外,尚见胞浆内线粒体肿胀和嵴消失,粗面内质网囊泡化和脱粒,多聚核蛋白体解聚。
3.5.全草的乙醇提取物对小鼠肝癌皮下型的肿瘤抑制率达50%以上。
3.6.鹤草酚对小鼠肉瘤-37也有抑制作用。
4.止血作用:临床上用仙鹤草素作止血剂已有数十年历史,但对其止血作用的动物实验研究未取得一致看法。
4.1.早期研究报告指示,仙鹤草及其醇提物均有促进凝血的作用。粗制浸膏也有促进血液凝固的作用,蛙腿灌流时并有收缩周围血管作用。小鼠静脉注射仙鹤草素后,出血时间缩短45%。家兔静脉注射,可大大缩短其血凝时间,井使血小板数增加。实验性狗股动脉出血时,局部应用仙鹤草粉并加压迫,有一定止血效果。
4.2.有报道仙鹤草素钠盐2mg/kg给兔静脉注射,做凝血时间(玻片挑针法)、血小板计数及血凝去钙加钙凝固试验,证明血液凝固时间显着加速,血小板计数明显增加,并谓仙鹤草素可增进血液凝固速度20%-30%,但也有认为仙鹤草素无止血作用,未能证实市售仙鹤草素注射剂有促进血凝作用,大剂量(15mg/kg)还能显着延长血凝时间;仙鹤草所含的仙鹤草素甲、乙、丙及另一种酚性树脂酸均无血凝作用。
5.对循环系统的作用:仙鹤草乙醇浸膏给麻醉兔、犬静脉注射,可使血压上升,并能兴奋呼吸,而其水提部分的醇提取物却能使家兔的血压降低。兔耳及蛙后肢血管灌流时,低浓度使血管的缩,高浓度则扩张。也有报告指示,仙鹤草浸剂及提取物灌流兔耳血管,低浓度时无影响,高浓度亦呈扩张反应,并能对抗肾上腺素的缩血管作用。浸剂及仙鹤草素对离体蛙心均有强心作用;能增加蛙及蟾蜍的心率及收缩强度,而水提部分的乙醇提取物对离体蛙心则有抑制作用。仙鹤草素对离体兔心,1∶100000-1∶5000浓度均能增加其收缩振幅,增加之程度与浓度呈正比。正常兔静脉注射4mg,不影响其心电图。表明小剂量可加大心脏收缩幅度,中等剂量可使心率与心缩幅均略增加,大剂量则使心搏徐缓和缩幅度更大。
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